Kõrgsurve-vedelikkromatograafia

Allikas: Vikipeedia
HPLC aparatuuri ehitus skemaatiliselt, kus 1 – pudelid eluentidega, 2 – eluendi degasaator, 3 – gradientkraan, 4 – eluendi sisestamise nõu, 5 – kõrgsurvepump, 6 – kraan sisestamise asendis, 6’ – kraani laadimisasend, 7 – silmus, 8 – eelkolonn, 9 – kromatograafiline kolonn, 10 – detektor, 11 – andmete töötlemise seade, 12 – jääkide või fraktsiooni koguja.

Kõrgsurve-vedelikkromatograafia (high-pressure liquid chromatography, HPLC) on kromatograafiline tehnika, mille korral kasutatakse liikuva faasina vedelikke (eluent) ja statsionaarse faasina väga peeneteralisi (suurusjärgus 5μm) kromatograafilise kolonni täidiseid. Nimetatakse seda meetodit ka kõrgefektiivne vedelikukromatograafia (high-performance liquid chromatography, HPLC). Peeneteralise täidise suure takistuse tõttu tuleb proovi eluendiga kolonnist läbivoolutamiseks kasutada survepumpa, et saavutada piisav vedeliku rõhk (kuni 400 at). Välja on arendatud HPLC spetsiifilised aparatuursed lahendused.

Võrdluseks: Olulise lisasurveta kromatograafia korral kasutatakse mõistet "kolonnkromatograafia". Siin ainete segu lahutatakse täidiskolonnis kusjuures tavaliselt eluent liigub kolonnist läbi vedelikusamba raskuksjõu mõjul.

Täidiskolonnide korral on selle parameetritel oluline tähtsus kolonni lahutusvõimele: pikema ja peenema täidisega kolonni lahutusvõime on palju suurem, kuid, teiseltpoolt, nõuab see vedeliku täidisest läbisurumiseks (suurt) rõhku. Selleks on välja töötatud efektiivsemad (kiiremad) surve-vedelikukromatograafia meetodid.

Tänapäeval on aparatuuri tootvad firmad välja arendanud automatiseeritud surve-vedelikukromatograafia süsteemid vastavalt vajadustele. Need seadmed on varustatud rõhu tõstmise pumbaga, pakitud kolonni(de)ga, detektoriga ja automaatse fraktsioneerimisseadmega.

  • madalsurve vedelikukromatograafia (LPLC, nn flash, kuni 525 kPa ehk kuni 5 atm)
  • kesksurve vedelikukromatograafia (MPLC, üle 1MPa ehk üle 10 atm)
  • kõrgsurve vedelikukromatograafia (HPLC, kuni 40 MPa ehk 400 atm)
  • ülikõrgsurve vedelikukromatograafia (UPLC ehk U-HPLC, kuni 100 MPa ehk kuni 1000 atm)

Uuritava segu komponentide lahutusvõime on LPLC süsteemidel alati madalam kui HPLC korral, kuid esimesed on lihtsamad ja odavamad.


Kõrgsurvekromatograafiat kasutatakse biokeemias ja analüütilises keemias uuritava segu komponentide identifitseerimiseks või komponentide suhtelise sisalduse määramiseks (kolonni sisediameeter tavaliselt 4,6 mm) või mingi komponendi puhastamiseks ja kogumiseks (kolonni sisediameeter üle 10 mm).

Kõrgsurve vedelikukromatograafias kasutatakse erinevat tüüpi statsionaarse faasiga täidetud kolonne, millest sõltub ainete lahutamise mehhanism ja vastavalt sellele eristatakse rida meetodeid. HPLC – kui üldise aparatuurse tehnika – enamtuntud meetodid (ja meetodite modifikatsioonid) on järgmised:

Vaata ka[muuda | redigeeri lähteteksti]